操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。
下列相關產(chǎn)品：
通用型H1-H15亞型PCR試劑盒

禽腦脊髓炎病毒（AEV）核酸檢測試劑盒

禽皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

禽皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果,。因此,，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法，已得到,，廣泛用于基因表達研究,、轉基因研究，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領域,。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b,、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記,。在模板擴增的同時，內標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度,，以內標為對照定量待檢測模板。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內標，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
TSFP1/SP1(transcription factor Sp1) SP1轉錄生長因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-A Raf/ARAF A-Raf抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh peripherin 外周蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Chromogranin A 嗜鉻素 1:300 濃縮液 0.1ml 進口分裝

TNF beta 英文名稱： 壞死因子β抗體(TNFβ) 0.1ml

Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) 英文名稱： 0酸化細胞質膜微囊蛋白-1抗體 0.1ml

Anti-A Raf/ARAF A-Raf抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

IgM whole serum 羊抗小鼠IgM抗血清 1ml

Ferritin Light Chain： 鐵蛋白輕鏈抗體 0.1ml

胰島素受體底物-4抗體 Anti-IRS-4 0.2ml

Anti-PTGEs/FITC 熒光素標記前列腺素E合成酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-PRKAB1(Ser182) 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶β1抗體 規(guī)格 0.1ml

THY (thyroglobulin,TG) 甲狀腺球蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 10mg
脊髓灰質炎病毒型PCR檢測試劑盒小鼠同型半胱酸(HA)ELISA試劑盒 ，英文名： HA ELISA Kit

豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA檢測試劑盒GuineaPigadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit 96T/48T

牛前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒 Bovine Prostaglandin E2,PGE2 ELISA Kit

英文名稱HumanMaixmetalloproteinase-2—MMP-2ELISAkit人基質金屬2(MMP-2)規(guī)格：96T/48T

動物全血高質化線粒體分離試劑盒10次

ratProstaglandinF,PG-FELISA試劑盒大鼠前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。