操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。
下列相關產(chǎn)品：
莫氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

莫氏立克次體PCR檢測試劑盒

莫氏立克次體探針法熒光定量PCR試劑盒

貉源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結果,。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到,，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領域,。
定量PCR方法：
a,、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標,，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2) 組織因子途徑抑制劑-2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PDZD7 PDZ結構域PDZK7蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

CD19(frozen) 濃縮液 0.1ml 進口分裝

TRADD 英文名稱： 壞死因子受體1相關死亡域蛋白抗體 0.1ml

Connexin 26 英文名稱： 間隙連接蛋白26抗體 0.1ml

Anti-Bone sialoprotein 骨涎蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ZAK： 抑制蛋白4抗體 0.2ml

DUSP4： 原活化蛋白激酶0酸酶-2抗體 0.1ml

自噬相關蛋白7抗體 Anti-ATG7 0.1ml

Anti-CD184/CXC-R4/PE 熒光素PE標記細胞表面趨化因子受體4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-EIF4B (Ser422) 0酸化真核翻譯起始因子4B抗體 規(guī)格 0.1ml

ELK1 細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
細刺奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒小鼠D3(VD3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat osteopoin (OPN) ELISA Kit 大鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒

HumanlumicanELISAKit 人基膜聚糖(lumican)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerleukin9,IL-9ELISA試劑盒雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞INSULI-ALPHA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

Mouseglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。