實(shí)時熒光定量PCR：
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,，因此,，實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性定量方法,，已得到,，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存,。

下列相關(guān)產(chǎn)品：
馬類圓線蟲PCR檢測試劑盒

馬類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

馬梨形蟲病(Piroplasmosis)雙重核酸檢測試劑盒

馬立克氏病病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

PCR實(shí)驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）,。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強(qiáng)度,，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物,，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗，若加入內(nèi)標(biāo),，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
COX-2(human) 人前列腺素氧化環(huán)化酶2Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CD150/SLAM 信號淋巴細(xì)胞活化分子CD150抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NIPA 間變性淋巴瘤激酶核相互作用伴侶蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

Human Calreticulin,CRT ELISA Kit 人鈣網(wǎng)蛋白 96T

TRIB2 英文名稱： MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體 0.2ml

CENPBD1 英文名稱： CENPBD1蛋白抗體 0.1ml

Anti-CD150/SLAM 信號淋巴細(xì)胞活化分子CD150抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

SV2A： 突觸泡蛋白2A抗體 0.2ml

FREAC3： 叉頭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3抗體 0.1ml

瘦素抗體 Anti-Leptin 0.2ml

anti-RAP1A/FITC 熒光素標(biāo)記抗Rap1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 0酸化0酯酶Cγ2抗體 規(guī)格 0.1ml

Beta-Amyloid (1-42) β淀粉樣肽(1-42)(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1mg
肝胰腺壞死性細(xì)菌PCR檢測試劑盒小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 ,，英文名： ICAM-1/CD54 ELISA Kit

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA檢測試劑盒MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit 96T/48T

人核糖核酸抑止劑(RNH1/PRI/RNH)免疫試劑盒 Human Ribonuclease inhibitor,RNH1/PRI/RNH ELISA Kit

RatDesmin,DesELISAKit大鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-甲基-2-苯并噻唑腙鹽酸鹽(3-methyl-2-benzothiazolinonehydrazone;MBTH)10/20克

MouseEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISA試劑盒小鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T