操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
封閉毛細線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲腐臭病）探針法熒光定量PCR試劑盒

蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

麩質(zhì)Gluten基因PCR檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法，已得到,，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。
定量PCR方法：
a,、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）,。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記,。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標,，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1) 谷受體1(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-phospho-Androgen Receptor (Ser595) 0酸化雄激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-ATG16A(Ser213) 0酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體 規(guī)格 0.1ml

大鼠SP(AP)試劑盒 140片 進口原料

Ube2B 英文名稱： 泛素激活酶2B抗體 0.2ml

ASB2 英文名稱： 含錨蛋白重復(fù)序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體 0.2ml

Anti-phospho-Androgen Receptor (Ser595) 0酸化雄激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Snake poison Protein： 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇) 0.2ml

ECH1： 烯酰水合酶1抗體 0.2ml

臂板蛋白3A抗體 Anti-Sema3A 0.2ml

Anti-Tat/FITC 熒光素標記細胞酪轉(zhuǎn)氨酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser396) 0酸化肌細胞增強因子2C抗體 規(guī)格 0.1ml

IRS P53 (Insulin receptor substrate P53)(多肽) Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
鳩寧病毒PCR檢測試劑盒小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat secretory immunoglobulin A (sIgA) ELISA Kit 大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒

HumanCholicacidELISAKit 人膽酸(Cholicacid)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISA試劑盒兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

油類E高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

MouseIerferonγ,IFN-γELISAKitKit小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。