實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性定量方法,，已得到,，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

下列相關(guān)產(chǎn)品：
產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（大腸埃希氏菌）O139血清型探針法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（大腸埃希氏菌）探針法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌PCR檢測試劑盒

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌血清型PCR檢測試劑盒

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）,。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記，下游引物不標記,。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標,，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
S100B S100B蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml

Anti-Bcl-10/CLAP Bcl-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PHGDH 0酸甘油酸脫氫酶抗體 規(guī)格 0.2ml

IGF-1R 濃縮液 0.1ml 進口分裝

URG4 英文名稱： 上調(diào)基因4抗體(N端) 0.2ml

C16orf72 英文名稱： 16號染色體開放閱讀框72抗體 0.1ml

Anti-Bcl-10/CLAP Bcl-10抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

SIPA1： 信號誘導增殖相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml

Phospho-ELk1(Ser383)： 0酸化細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體 0.1ml

X射線修復交叉互補蛋白/細胞堿基切除修復基因抗體 Anti-XRCC1 0.1ml

Anti-TSLPR/CRLF2/FITC 熒光素標記兔抗人,、大、小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181) 0酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 規(guī)格 0.1ml

CASP4(Caspase-4) 半胱胺酸蛋白-4抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
單孢子蟲通用PCR檢測試劑盒小鼠循環(huán)免疫復合物(CIC)ELISA試劑盒 ,，英文名： CIC ELISA Kit

小鼠同型半胱(Hcy)ELISA檢測試劑盒MouseHomocysteicacid,HcyELISAKit 96T/48T

6(KLK 6)免疫試劑盒 Human Kallikrein 6,KLK 6 ELISA Kit

Ratbrain-gpeptides,BGP/GehrelinELISAKit大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

10%Brij-35100毫升

MouseBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISA試劑盒小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T