實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。

操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

下列相關(guān)產(chǎn)品：
馬皰疹病毒4型PCR檢測試劑盒

馬皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒

馬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒

馬皮疽組織胞漿菌PCR檢測試劑盒

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。

定量PCR方法：
a、競爭法　　產(chǎn)品僅用于科研實驗
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,，下游引物不標記,。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c,、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標,，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
6-O-Methylcerevisterol  中文名：  分子式：C29H48O3  度：97.0%  兔前列腺素E1elisa試劑盒   兔前列腺素E1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔前列腺素E1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔前列腺素E1試劑盒、兔前列腺素E1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。  

Daturataturin A  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%  兔型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔型纖溶酶原激活物受體試劑盒,、兔型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

8-Hydroxyodoroside A  中文名：  分子式：C30H46O8  度：96.0%  兔型纖溶酶原激活物elisa試劑盒   兔型纖溶酶原激活物試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔型纖溶酶原激活物試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔型纖溶酶原激活物試劑盒,、兔型纖溶酶原激活物elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。

21-Deoxyneridienone B  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  兔細胞功能相關(guān)抗原3elisa試劑盒   兔細胞功能相關(guān)抗原3試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔細胞功能相關(guān)抗原3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔細胞功能相關(guān)抗原3試劑盒、兔細胞功能相關(guān)抗原3 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。

Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside  中文名：  分子式：C36H52O13  度：98.5%  兔粒細胞集落刺激因子elisa試劑盒   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔粒細胞集落刺激因子試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔粒細胞集落刺激因子試劑盒,、兔粒細胞集落刺激因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月,。

105784-61-0  Temafloxacin (hydrochloride)  25mg  山羊源性成分LAMP試劑盒  種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒

105784-61-0  Temafloxacin (hydrochloride)  5mg  蛇源性成分LAMP試劑盒  種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒

105802-82-2  H-Val-Arg-Lys-Arg-Thr-Leu-Arg-Arg-Leu-OH  1mg  山羊源性成分LAMP試劑盒  種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒

105802-82-2  H-Val-Arg-Lys-Arg-Thr-Leu-Arg-Arg-Leu-OH  5mg  牛源性成分LAMP試劑盒  種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒

1058137-23-7  E-3810  10mg  貉源性成分LAMP試劑盒  種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒
布尼亞維拉病毒PCR檢測試劑盒1032568-63-0  BAY 80-6946 (Copanlisib)  50mg  Radix aucklandiae木香PCR鑒定試劑盒 

103-26-4  Methyl cinnamate  100mg  Semen oroxyli木蝴蝶PCR鑒定試劑盒 

10326-41-7  D-(-)-Lactic acid  100mg  Semen oroxyli木蝴蝶PCR鑒定試劑盒 

10326-41-7  D-(-)-Lactic acid  500mg  Fructus chaenomelis木瓜PCR鑒定試劑盒 

1032-65-1  2-Deoxycytidine 5-monophosphate  1g  Fructus chaenomelis木瓜PCR鑒定試劑盒