操作流程
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
霍亂弧菌O139群PCR檢測試劑盒

霍亂弧菌O1群PCR檢測試劑盒

霍亂弧菌PCR檢測試劑盒

霍亂弧菌通用PCR檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定,，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b,、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴增的同時,，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板,。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標(biāo)記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,，再加入抗di高辛酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O  度：98.0%  小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3,3'-Sulfonyldianiline  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%  小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

1,4-Bis[2-(4-methyl-5-phenyloxazolyl)]benzene  中文名：1,4-二[2-(4--5-苯基惡唑基)]苯  分子式：C26H20N2O2  度：%  小鼠白介素-23(mouse IL-23)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Bis(3-ethyl-5-methyl-4-maleimidophenyl)methane  中文名：雙(3-乙基-5--4-馬來基苯基)甲烷  分子式：C27H26N2O4  度：98.0%  小鼠白介素-27(mouse IL-27)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Bisphenol P  中文名：雙酚P  分子式：C24H26O2  度：98.0%  小鼠胰島素(mouse Insulin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

1032568-63-0  BAY 80-6946 (Copanlisib)  10mg  Radix aucklandiae木香PCR鑒定試劑盒 

1032568-63-0  BAY 80-6946 (Copanlisib)  10mM(in1mLDMSO)  Radix adenophorae南沙參PCR鑒定試劑盒 

1032568-63-0  BAY 80-6946 (Copanlisib)  50mg  Radix aucklandiae木香PCR鑒定試劑盒 

1032568-63-0  BAY 80-6946 (Copanlisib)  5mg  Radix adenophorae南沙參PCR鑒定試劑盒 

103-26-4  Methyl cinnamate  100mg  Semen oroxyli木蝴蝶PCR鑒定試劑盒
箭毒蛙壺菌PCR檢測試劑盒100900-22-9  (H-Cys-βNA)??· 2 HCl  1g  Cacumen platycladi側(cè)柏葉探針法PCR鑒定試劑盒 

100900-22-9  (H-Cys-βNA)??· 2 HCl  5g  Cacumen platycladi側(cè)柏葉探針法PCR鑒定試劑盒 

100900-23-0  Cholecystokinin-33 (10-20) (bovine, porcine)  5mg  Radix aconiti kusnezoffii草烏探針法PCR鑒定試劑盒 

100900-23-0  Cholecystokinin-33 (10-20) (bovine, porcine)  25mg  Radix aconiti kusnezoffii草烏探針法PCR鑒定試劑盒 

100900-26-3  H-Arg-Arg-βNA . 3 HCl  50mg  Fructus tsaoko草果探針法PCR鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。