詳細介紹
下列相關產(chǎn)品:
狐貍源性成分(Vulpes)核酸檢測試劑盒
弧菌通用PCR檢測試劑盒
胡桃PCR檢測試劑盒
花生PCR檢測試劑盒
操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒 | Baculoviral Midgut Gland Necrosis Type Virus (BMNV)PCR | 50T |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,,通過對每個樣品Ct值的計算,,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,,因此Ct值的重現(xiàn)性,,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的,。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,,重現(xiàn)性定量方法,,已得到,廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域,。
定量PCR方法:
a,、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記),。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,,而待測模板不被酶切,,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,,內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,下游引物不標記,。在模板擴增的同時,,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛等標記引物,,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合,,再加入抗di高辛酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,,也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,;
3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加,。
4.除空白孔外,,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,37℃避光孵育15min,。產(chǎn)品僅用于科研實驗
7.每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品:
3T3-E1細胞,,鼠胚成骨細胞 U937(組織細胞瘤) 山羊皮膚細胞;WGS1地拉羅司-d4Deferasirox-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進口
EFNB2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標簽)N-去乙基舒尼替尼N-Desethyl Sunitinib質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CW-2(結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 表皮角化細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N,N-二去乙基舒尼替尼鹽酸鹽N,N-Didesethyl Sunitinib 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
表皮色素細胞-中色素HEM-m舒尼替尼-d10Sunitinib-d10質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 細胞裂解液 (陽性對照)13C,D2(主要的)FK-506-13C, D2 (Major)質(zhì)量規(guī)格:美國進口
非色素睫狀上皮細胞 (HNPCEpiC)( 5×105 ) LX-2, 肝星形細胞株 Human大黃素(標準品)Emodin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,,標準品
結直腸腺癌細胞;HT-29大黃酸Rhein質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,,BR
PFKFB3 Others Human PFK2 / PFKFB3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 大黃酸(標準品)Rhein質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
CM-R014大鼠氣管和支氣管上皮細胞培養(yǎng)基100mL大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷(標準品)Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
GBC-SD, 膽囊癌細胞 猴腎細胞,HepII細胞 TE 354.T(皮膚基底細胞癌)大薊苷Pectolinarin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,,標準品
中腸腺壞死桿狀病毒PCR檢測試劑盒1175077-25-4 LYG-202 5mg Mycobacterium paratuberculosis副結核分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117548-22-8 5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester) 100mg Mycobacterium marinum海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117548-22-8 5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester) 10mM*1mLinWater Mycobacterium microti田鼠分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
117548-22-8 5(6)-FAM SE (5(6)-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester) 50mg Mycobacterium marinum海魚分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
1175526-27-8 AM211 (AM211 free acid) 100mg Mycobacterium kansasii堪薩斯分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒