操作流程
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存,。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。
下列相關(guān)產(chǎn)品：
奧利華斯病毒PCR檢測試劑盒

奧斯特奧斯特線蟲PCR檢測試劑盒

奧斯特線蟲通用PCR檢測試劑盒

巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算,，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性,，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法,。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,，重現(xiàn)性定量方法,，已得到，廣泛用于基因表達研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。
定量PCR方法：
a,、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）,。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切,，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,，內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記，下游引物不標記,。在模板擴增的同時,，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度,，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板,。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛等標記引物,，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,，再加入抗di高辛酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標，作出標準曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的,。
下列是公司正在銷售的產(chǎn)品：
(2-Benzothiazolylthio)acetic acid  6295-57-4  中文名：2-(苯并噻唑基硫代)乙酸  分子式：C9H7NO2S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(1S,2S)-1-Amino-2-Indanol  163061-74-3  中文名：(1S,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(1S,2R)-2-Amino-1,2-diphenylethanol  23364-44-5  中文名：(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

(1S,2R)-1-Amino-2-indanol  126456-43-7  中文名：(1S,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠干擾素-a(mouse IFN-a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

(1S)-4,5-Dimethoxy-1-[(methylamino)methyl]benzocyclobutane   866783-13-3  中文名：  分子式：C12H18ClNO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠干擾素-b(mouse IFN-b)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

102625-64-9  Pantoprazole Sulfide  1g  Fructus perillae紫蘇子PCR鑒定試劑盒 

102625-64-9  Pantoprazole Sulfide  5g  Fructus perillae紫蘇子PCR鑒定試劑盒 

102625-70-7  Pantoprazole  100mg  Caulis perillae紫蘇梗PCR鑒定試劑盒 

102625-70-7  Pantoprazole  10mM(in1mLDMSO)  Folium perillae紫蘇葉PCR鑒定試劑盒 

102625-70-7  Pantoprazole  500mg  Caulis perillae紫蘇梗PCR鑒定試劑盒
無色桿菌屬通用PCR檢測試劑盒1002-84-2  Pentadecanoic acid  1g  Fructus aristolochiae馬兜鈴探針法PCR鑒定試劑盒 

100286-90-6  Irinotecan hydrochloride  50mg  Herba portulacae馬齒莧探針法PCR鑒定試劑盒 

100286-90-6  Irinotecan hydrochloride  100mg  Herba portulacae馬齒莧探針法PCR鑒定試劑盒 

100286-90-6  Irinotecan hydrochloride  200mg  Lasiosphaera seu calvatia馬勃探針法PCR鑒定試劑盒 

100286-90-6  Irinotecan hydrochloride  500mg  Lasiosphaera seu calvatia馬勃探針法PCR鑒定試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。