詳細(xì)介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶,。*,酶是一種有機(jī)催化劑,,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點(diǎn)多,更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn),,是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴,。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
TPO-Ab ELISA Kit | GOY-E99672 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備,;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,,37°C孵育1小時(shí);
3. 吸棄,,加檢測溶液A100µL,,37°C孵育1小時(shí);
4. 洗板3次,;
5. 加檢測溶液B100µL,,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,,37°C孵育10-20分鐘,;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù),。?
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
(3)尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行,。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1.加樣:
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),,可分批次操作,,以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗(yàn)時(shí),使用加樣器加注試劑,,并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,,此外,要做到一份樣本一個(gè)移液頭,,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應(yīng)時(shí)間的條件,;
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時(shí),,拍板時(shí)要垂直,,避免交叉污染,用力不能過猛,,防止抗原抗體復(fù)合物脫離,;
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,或適當(dāng)增加洗板的次數(shù),;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,,定性測定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,,需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試。
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TPO-Ab抗甲狀腺過氧化物酶抗體ELISA KitDonkey Anti-Guinea pig IgG/Bio 生物素標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRFTN2 RFTN2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-A Raf(Tyr301/302) 磷酸化A-Raf抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-EGFR (Thr693) 磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Metallothionein 金屬硫蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlKir6.2 ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體 規(guī)格: 0.1ml
ANKRD13A 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13A抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-HMGCR(Ser872) 磷酸化三羥基*基輔酶A還原酶抗體 規(guī)格: 0.1ml
BCNG1/HCN1 腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlIFNA4/IFNA76/IFNA M1 干擾素α4抗體 規(guī)格: 0.2ml
ILVBL 乙酰酸合成酶蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlBCL7B BCL7B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
FAM134C FAM134C蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ATG4C(Ser166) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體 規(guī)格: 0.1ml
Leptin receptor(long) 瘦素受體抗體() 規(guī)格: 0.1mlCTDSPL2 CTDSPL2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
C21orf2 21號染色體開放閱讀框2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-CREB-1(Ser142) 磷酸化CREB-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Protein C inhibitor/SerpinA5 蛋白C抑制因子抗體 規(guī)格: 0.1mlC11orf57 11號染色體開放閱讀框57抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-PI3K p85(Tyr458)/p55(Tyr199) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta-Amyloid(1-16) (human) β淀粉樣肽(1-16)抗體(人) 規(guī)格: 0.1ml
HSP90 alpha 熱休克蛋白90α/HSP90 α抗體 規(guī)格: 0.2mlE.coli/EPEC 大腸埃希菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Tetranectin/CLEC3B/TNA 四連接素TN抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml