使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶。*,，酶是一種有機(jī)催化劑,，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

ELISA Kit檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn),，是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴,。

實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備,；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL,，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄,，加檢測(cè)溶液A100µL,，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次,；
5. 加檢測(cè)溶液B100µL,，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次,；
7. 加TMB底物90µL,，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL,，立即450nm讀數(shù),。
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
（3）尿液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。
注意事項(xiàng)：
1.加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),，可分批次操作,，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；
②加酶試劑后,，用吸水紙吸干孔外試劑,；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑,，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭,，防止交叉污染,。
2.溫育：
①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度,、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件,；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”,，因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板：
①手工洗板時(shí),，拍板時(shí)要垂直,，避免交叉污染，用力不能過猛,，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出,；
③為了洗滌效果好,，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù),；
4.顯色：
ELISA試劑盒中,，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,；如以鄰苯二胺(OPD)為底物,，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,，但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí),，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試。

猴蛋白激酶抑制劑β(PKIβ)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴叉頭框蛋白O3(FOXO3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

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猴成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3(FGFR3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴環(huán)氧合酶-2受體(COX-2R)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

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猴前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴凝血因子Ⅷ(F8)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴破骨細(xì)胞分化因子(ODF)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴F-框蛋白2(FBXO2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

猴接觸蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

猴肝癌抗原(PHC)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

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