詳細介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。*,酶是一種有機催化劑,,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,,是科研實驗的好伙伴,。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
sCD21 ELISA Kit | GOY-E99696 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備,;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,,加檢測溶液A100µL,,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次,;
5. 加檢測溶液B100µL,,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次,;
7. 加TMB底物90µL,,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,,立即450nm讀數,。?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清等,。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。
(3)尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實行,。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,,以減少實驗時間延長造成的誤差,;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗時,,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,,此外,,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,,盡量使用較低的溫育溫度,、較長反應時間的條件,;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時,,拍板時要垂直,,避免交叉污染,用力不能過猛,,防止抗原抗體復合物脫離,;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出,;
③為了洗滌效果好,,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,,或適當增加洗板的次數,;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,,則提供的底物為A和B兩瓶應用液,;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑,。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A,、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,,需先預熱15-30 min再進行測試。
雞信號素3B (SEMA3B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞蛋白酪氨酸磷酸酶受體N(PTPRN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞p53上調凋亡調節(jié)因子(PUMA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞淋巴細胞功能相關抗原1(LFA-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞橋粒斑蛋白(DSP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞轉化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞內皮脂肪酶(EL/LIPG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞α2抗纖溶酶(α2-AP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞信號傳導轉錄激活因子6(STAT56)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞T細胞受體(TCR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞游離三碘甲狀腺原氨酸(fT3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
雞基質金屬蛋白酶7(MMP-7)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
CR2/sCD21可溶性白細胞分化抗原21ELISA KitMKP-2/DUSP4 絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Ankyrin G 錨定蛋白G抗體 規(guī)格: 0.2ml
NDRG3 抑基因NDRG3抗體 規(guī)格: 0.1ml
HB EGF/DTSF 肝素結合性表皮生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
TGFB4/LEFTY2 轉化生因子β4抗體 規(guī)格: 0.2ml
C20orf112 20號染色體開放閱讀框112抗體 規(guī)格: 0.2ml
PSA(PA5) 鼠抗人前列特異性抗原單克隆抗體(檢測) 規(guī)格: 0.1ml
IQCC IQCC蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-PRKCB(Ser660) 磷酸化蛋白激酶C抗體 規(guī)格: 0.1ml
Lactic acid bacterial protein surface 酸菌菌體表面蛋白抗體 規(guī)格: 1ml
P53(wt-p53) 瘤抑制基因抗體(野生型P53) 規(guī)格: 0.1ml
GAD65 谷氨酸脫羧酶-65抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml
CD133 造干細胞抗原CD133抗體 0.1ml
RBM26 RNA結合蛋白26抗體 規(guī)格: 0.2ml