詳細介紹
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務,。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸定性檢測試劑盒 | 50T | GOY-M7021 |
實驗過程:
一,、腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,,而不能從無到有,,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物,??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設計,。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二,、操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min,。
3.結束反應,,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測
三,、腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行,。好設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響,。一般而言,,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好,。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染,。操作過程中均應戴手套。
特點優(yōu)勢:
1.特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,,特異性均達到100%,。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%,。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,,無需繁瑣的增菌過程,。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,,除TIANDZ公布的序列外,,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性,。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
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