產(chǎn)品名稱：腸出血性大腸桿菌O157核酸檢測試劑盒
規(guī)格：48T
貨號：GOY-M7237
分類：核酸檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融,。
運輸：低溫,、避光，快遞免費送貨上門,。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,，設計并合成引物,，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您,。
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合,；
②堿基配對原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結合是關鍵,。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,，結合的特異性大大增加,，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,；在病毒的檢測中,，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便,、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后,，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,，不一定要用同位素,，無放射性污染、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細胞、活PCR技術概論,。

操作流程：
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 ,、耗材應獨立使用,，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 為避免RNA降解,，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理,。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照,。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),，并單獨存放,。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記,。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用,。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄,。

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