以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CDK9-IN-2是一種特異性的CDK9抑制劑,,詳細(xì)信息請參考WO/2012131594A1中的化合物CDKI(8),。CDK9-IN-2作用于H929多發(fā)性骨髓瘤(MM)細(xì)胞系(72小時)和A2058黑色素瘤細(xì)胞系(72小時),IC50分別為5nM和7nM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1263369-28-3 純度:99.83% 分子量:425.93 儲存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
胡椒(白胡椒)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl ricinoleate磷化脂肪型脂肪結(jié)合蛋白包裝5g
胡椒(黑胡椒)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl behenate脂肪結(jié)合蛋白12抗體包裝1g
胡椒堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl tetracosanoate四連接同源蛋白FJX1抗體包裝5g
胡蘿卜苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl cis-13-docosenoateG蛋白偶聯(lián)受體γ3抗體包裝1g
胡麻屬苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nonadecanoic AcidG蛋白偶聯(lián)受體γ7抗體包裝25g
湖北貝母(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oleic acidG蛋白結(jié)合蛋白α13/Gα13抗體包裝5g
葫蘆巴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: trans-9-Octadecenoic methyl esterG蛋白結(jié)合蛋白α16/Gα16抗體包裝100mg
葫蘆巴堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Para RedG蛋白α抑制劑抗體包裝100g
葫蘆巴堿鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Petroselinic acidG蛋白受體α x+z抗體包裝25g
葫蘆A英文名稱: D-Panthenol半乳糖神經(jīng)??贵w包裝500g
葫蘆B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Saccharin sodium salt solution磷化葡萄糖合成1抗體包裝100ml
葫蘆D;葫蘆苦D英文名稱: γ-Undecanolactone半乳糖凝集3抗體包裝25ml
葫蘆E(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Undecanone生長因子受體結(jié)合蛋白7抗體包裝1g
槲寄生(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2′-Deoxycytidine hydrochloride糖基轉(zhuǎn)移1結(jié)構(gòu)域1抗體包裝5g
槲皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ammonium phosphatedi basicG蛋白偶聯(lián)受體LGR7蛋白抗體包裝1g
高溫放線菌屬Thermoactinomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR絨毛膜促性腺激試劑盒普拉洛芬;Pranoprofen
藻瑚菌Multiclavula│mucida (Pers.) R.H. Petersen 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)血漿蛋白A試劑盒派利文堿;Perivine
安卡紅曲Monascus│anka 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,BR特異性蛋白B試劑盒霹靂蘿芙木堿;Perakine
CDK9抑制劑(CDK9-IN-2)血小板源性生長因子受體-B(抗原)嗎替麥考酚酯/霉酚酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
外周髓鞘蛋白-22多肽麥白霉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
磷脂酰肌激(抗原)麥迪霉(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse
骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(抗原)麥芽三糖(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
小鼠胎盤生長因子(多肽抗原)麥芽糖(標(biāo)準(zhǔn)品)Human
胎盤生長因子(多肽抗原)沒食子乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
人胎盤生長因子(多肽抗原)霉酚; 麥考酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
蛋白磷酯-1(抗原)美(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat
骨成型蛋白受體1A抗原美羅培南(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Rat