詳細介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。,酶是一種有機催化劑,,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,,產生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴,。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
LR/Ob-R ELISA Kit | GOY-E100166 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品,、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,,37°C孵育1小時,;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,,37°C孵育1小時,;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,,37°C孵育30分鐘,;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,,37°C孵育10-20分鐘,;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù),。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等,。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實行,。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,,可分批次操作,,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,,用吸水紙吸干孔外試劑,;
③作定量試驗時,,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,,此外,,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染,。
2.溫育:
①如有兩種溫度,,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件,;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察,;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,,避免交叉污染,,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離,;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù),;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液,;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,,但A,、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,,需先預熱15-30 min再進行測試,。
二維生素K1 質量規(guī)格:美國進口 Dihydrovitamin K1 NCI-H1688(人典型小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
高良姜素(標準品) 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Galangin 白色類諾卡氏菌 Nocardioides albus吸水鏈霉菌應城變種 Streptomyces hygroscopicus var. yingchengensis
二洛芬β-D-葡萄糖苷,非對映異構體混合物 質量規(guī)格:美國進口 Dihydro Ketoprofen β-D-Glucuronide, Mixture of Diastereomers A-427(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
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