詳細介紹
操作流程:
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服,、儀器 ,、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用,;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作,;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,,且完成實驗后立即上機檢測,;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰,、陽性對照,。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心,。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),,并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記,。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置,;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,,淬滅基因選擇None,。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,,設(shè)計并合成引物,,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您,。
產(chǎn)品名稱:異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒
規(guī)格:50T
貨號:GOY-M6854
分類:核酸檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫,、避光,,快遞免費送貨上門。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性,;
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),;在細菌學(xué)中小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便,、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),,一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng),。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,,無放射性污染,、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,。可直接用臨床標(biāo)本如血液,、體腔液,、洗嗽液、毛發(fā),、細胞,、活PCR技術(shù)概論。
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17 植物染色