大鼠精原干原代細胞

培養(yǎng)信息：

包被條件

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 球形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

大鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細胞,，是成體內(nèi)的定向干細胞,。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖,、分化等多項生命活動的調(diào)節(jié)機制的深入研究,，精子發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉(zhuǎn)染，異體,、異種移植技術(shù)的實際應用,，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng),。在哺乳動睪丸內(nèi),，精子發(fā)生時一個受高度調(diào)控和持續(xù)的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數(shù)量,，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至后生成精子,。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的原始細胞,，也是動物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細胞,。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學,、醫(yī)學,、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動物等領(lǐng)域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能,，是哺乳動物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠精原干細胞采用先機械吹打、后蛋白酶消化,，結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠精原干細胞經(jīng)CD44免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數(shù)有限約 2 代,，建議客戶收到細胞后盡快安排后續(xù)實驗)

1,、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜,，放入 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

2,、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。

3,、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養(yǎng)基,，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中,，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液,，再加入培養(yǎng)液終止消化,。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當?shù)谋壤M行接種傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL,，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4)待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察,，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基。

HO-8910細胞,，卵巢癌細胞 人胃腺癌細胞,MCG803細胞 大耳山羊肺細胞;LDG-1  IL21R Others Human 人 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細胞裂解液   Caco-2細胞,，結(jié)腸腺癌細胞 鼠激酶缺陷細胞株 小鼠角膜上皮細胞永生化細胞 人原代子宮內(nèi)膜成纖維細胞

HtrA絲肽酶4(HTRA4)重組蛋白 Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)

GRK6 Protein Human 重組人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 標簽)

IFNA4重組小鼠 IFNA4 / Interferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽) Protein

PVR Protein Rat 重組大鼠 CD155 / PVR / NECL5 蛋白

TMEM27重組人 TMEM27 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠胃泌素抑制肽(GIP)試劑盒 ，英文名： GIP ELISA Kit

Mouse aquaporin 1 (AQP-1) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒

Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISAKit 小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHSF-1(HumanHeatShockFactor1)ELISAKit人熱休克因子1

細胞NADPH氧化酶活性比色法定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKitIFN-γ大鼠γ干擾素

兔脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(rabbit A-FABP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔血管緊張素II(rabbit Angiotensin-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔骨成型蛋白-2(rabbit BMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔骨堿性0酸酶(rabbit BALP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

大鼠精原干原代細胞小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human vitamin C (VC) ELISA Kit 人C(VC)試劑盒

Humancalmodulin,CAMELISAKit 人鈣調(diào)素(CAM)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanchemerin試劑盒人chemerin試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米NK603品系試劑盒20次

Humanserineprotease,，PRSSELISAKit人絲蛋白酶(PRSS)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FCGR2B重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II

IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

CYGB Protein Human 重組人 Cytoglobin / CYGB 蛋白

AKT3 Protein Mouse 重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽)