ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實驗，是科研實驗的好伙伴。

實驗流程:
1. 實驗前標(biāo)準(zhǔn)品,、試劑及樣本的準(zhǔn)備,；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL，37°C孵育1小時,；
3. 吸棄,，加檢測溶液A100µL，37°C孵育1小時,；
4. 洗板3次,；
5. 加檢測溶液B100µL，37°C孵育30分鐘,；
6. 洗板5次,；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分鐘,；
8. 加終止液50µL,，立即450nm讀數(shù)。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
注意事項：
1.加樣：
①實驗樣本過多時，可分批次操作,，以減少實驗時間延長造成的誤差,；
②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑,；
③作定量試驗時,，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,，此外,，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染,。
2.溫育：
①如有兩種溫度,，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時間的條件；
②用1個小溫度計放置在板孔反應(yīng)液中測量觀察,；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會造成“邊緣效應(yīng)”,，因此盡量采用水浴,；
3.洗板：
①手工洗板時,，拍板時要垂直，避免交叉污染,，用力不能過猛,，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；
②洗板機(jī)洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,，若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出,；
③為了洗滌效果好，實驗室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次,，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù)；
4.顯色：
ELISA試劑盒中,，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液；如以鄰苯二胺(OPD)為底物,，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑,。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,，要臨用前30 min配制且必須避光,。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光，但A,、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械,。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成，定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm,；定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下,，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測試,。

Y1小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞1ml/T75

RM-1小鼠前列腺細(xì)胞1ml/T75

C6/36幼蚊細(xì)胞1ml/T75

RCFBF兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞1ml/T75

RYTF兔眼Tenon囊成纖維細(xì)胞1ml/T75

N/N1003A（RLE）兔晶體上皮細(xì)胞永生系1ml/T75

PG-4(S+L-)貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞1ml/T75

RF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜（內(nèi)皮）細(xì)胞1ml/T75

NBLE新生牛眼晶體上皮細(xì)胞1ml/T75

NBTF新生牛眼Tenon囊成纖維細(xì)胞1ml/T75

Rca-T鼠舌粘膜鱗癌細(xì)胞1ml/T75

Rca-B鼠頰粘膜鱗癌細(xì)胞1ml/T75

IR983F大鼠骨髓瘤細(xì)胞1ml/T75

Y3-Ag1.2.3大鼠骨髓瘤細(xì)胞1ml/T75

PLGA纖溶酶原激活劑ELISA KitTRPV2/VRL1  辣椒素受體樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MIP2/GRO Beta/CXCL2  巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（ GRＯβ）抗體 規(guī)格: 0.1ml

E Tag  E Tag標(biāo)簽抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-FLT3 (Tyr842)  磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3 規(guī)格: 0.1ml

CPa(Clostridium perfringens alpha toxin)  A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌) 規(guī)格: 0.2ml

VEGF-A/VEGF 165  管內(nèi)皮生因子A抗體 規(guī)格: 0.1ml

CYFIP2  細(xì)胞質(zhì)脆性X智力低下蛋白結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Integrin alpha 5/CD49e/ITGA5  整合素α5抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-MEK1/MAP2K1(Thr386)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml

NGALR/Slc22A17  可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體 規(guī)格: 0.1ml

RGAG4  RGAG4蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-NEDD4L (Ser342)  磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體 規(guī)格: 0.1ml

CCDC28A  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白28A抗體 規(guī)格: 0.2ml

DRAK1/STK17A  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶17A抗體（DAP凋亡誘導(dǎo)蛋白激酶1） 規(guī)格: 0.2ml

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。酶是一種有機(jī)催化劑,，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。