ELISA Kit檢測(cè)試劑盒優(yōu)點(diǎn)多，更加方便我們的科研學(xué)者進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn),，是科研實(shí)驗(yàn)的好伙伴,。

實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備,；
2. 加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）100µL,，37°C孵育1小時(shí)；
3. 吸棄,，加檢測(cè)溶液A100µL,，37°C孵育1小時(shí)；
4. 洗板3次,；
5. 加檢測(cè)溶液B100µL,，37°C孵育30分鐘；
6. 洗板5次,；
7. 加TMB底物90µL,，37°C孵育10-20分鐘；
8. 加終止液50µL,，立即450nm讀數(shù),。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。
注意事項(xiàng)：
1.加樣：
①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí),，可分批次操作,，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長造成的誤差；
②加酶試劑后,，用吸水紙吸干孔外試劑,；
③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑,，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性,，此外,，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染,。
2.溫育：
①如有兩種溫度,，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應(yīng)時(shí)間的條件,；
②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察,；
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度會(huì)造成“邊緣效應(yīng)”，因此盡量采用水??；
3.洗板：
①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直,，避免交叉污染,，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；
②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,，若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出；
③為了洗滌效果好,，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1-2次，或適當(dāng)增加洗板的次數(shù),；
4.顯色：
ELISA試劑盒中,，如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物，則提供的底物為A和B兩瓶應(yīng)用液,；如以鄰苯二胺(OPD)為底物,，則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15-30 min,。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,，要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,，但A、B液應(yīng)盡量避免接觸金屬器械,。
5.判定：
讀取結(jié)果要在15-30 min內(nèi)完成,，定性測(cè)定用肉眼判讀試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10-15 cm,；定量測(cè)定時(shí)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,，酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強(qiáng)光照射下，需先預(yù)熱15-30 min再進(jìn)行測(cè)試,。

膀胱平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 1×106 5×106

腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 1×106 5×106

內(nèi)膜上皮細(xì)胞 1×106 5×106

卵巢顆粒細(xì)胞 1×106 5×106

SMC兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞1ml/T75

HUV-EC人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞1ml/T75

HPASMC人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞1ml/T75

ES-2人胃癌細(xì)胞1ml/T75

MGC-803人胃癌細(xì)胞1ml/T75

BGC-823人胃腺癌細(xì)胞1ml/T75

SGC-7901人胃腺癌細(xì)胞1ml/T75

AGS人胃腺癌細(xì)胞1ml/T75

CW-2人結(jié)腸癌細(xì)胞1ml/T75

TS胸苷酸合成酶ELISA Kitphospho-KCND2/Kv4.2(Thr607)  磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Smad1  細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-RhoA(Ser188)  磷酸化RhoA蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

LIMS1  整合素和生因子樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基爾曼氏細(xì)小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端 1ml

PPP2R3  蛋白質(zhì)磷酸酶2A亞基3抗體 規(guī)格: 0.2ml

C21ORF56  21號(hào)染色體開放閱讀框56抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-Na+/K+-ATPase Alpha1(Ser 943)  磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體 規(guī)格: 0.2ml

PDCD4  凋亡相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

SNAI2/SLUG  鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-CaM I (Ser 101)  磷酸化鈣調(diào)節(jié)素抗體 規(guī)格: 0.1ml

ODF3/CT135  瘤/睪抗原135抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PTPN6(Tyr536)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

MRP2  多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml

使用方法：
測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告的酶,。,，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。   24μg/ml    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。