操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔,；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,，加入純細(xì)胞裂解液100μl,。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜,。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）,，之后將洗滌液注滿板孔,，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng),。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干,。重復(fù)洗滌3-4次,。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl,。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min。
（6）洗板,，同（4）,。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min,。
（9）洗板，同（4）,。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl,，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min,。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng),。
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2）,，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值,。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn),。

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,，而且其操作中有一定的技術(shù)要求,，在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果,。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素,；
②試劑因素；
③操作因素,。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù),！

檢測(cè)目的：用于檢測(cè)血漿，血清及相關(guān)液體等樣本,。例如灌洗液,、腦脊液、血清,、血漿,、尿液、胸腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等標(biāo)本.
檢測(cè)種屬：大鼠,、小鼠、豚鼠,、倉鼠,、裸鼠、兔子,、豬,、犬、猴,、馬,、牛、馬鈴薯,、鹿,、羊、雞,、鴨,、魚、人,、等動(dòng)植物,。
具有如下優(yōu)點(diǎn)：
   一、高效,、靈敏,、特異的抗體；
二,、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；
三、吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高的固相載體；
四,、適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五,、性價(jià)比非常好,，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

性能：
1) 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900,。
2) 靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 pg/ml,。
3)特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4) 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5) 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。
6) 有效期：6個(gè)月
注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
3.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
4.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
7.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。

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CK-20細(xì)胞角蛋白20ELISA Kit