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 CRP/PTX1 馬C反應(yīng)蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒說明書

實驗原理：

試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中17-OHP 表達,。用純化的17-OHP 抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中17-OHP 相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的17-OHP 抗體結(jié)合,，形成抗體 抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中17-OHP 的存在與否,。

樣本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作程序：

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50%l,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l,，然后再加待測樣品 10%l。加樣將樣品加 于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50%l，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3,。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l,，再加入顯色劑 B50%l,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50%l,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。

注意事項：

1． 操作嚴格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1530 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時,，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸,，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期：

1． 試劑盒保存：,；28℃,。

2．有效期：6 個月