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豬肉堿脂酰轉移酶（CACT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理
閱讀：157 發(fā)布時間：2019-3-22| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 95.6KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 157次 |
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豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：96T 6 U/L -300 U/L
使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清,、血漿及相關液體樣本中肉堿脂酰轉移酶(CACT)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)水平。用純化的豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入肉堿脂酰轉移酶(CACT)，再與HRP標記的肉堿脂酰轉移酶(CACT)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的肉堿脂酰轉移酶(CACT)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)濃度,。
豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
豬肉堿脂酰轉移酶(CACT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間應該控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，應該做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月