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植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒使用方法
閱讀：192 發(fā)布時間：2019-2-19| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 17.6KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 192次 |
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檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,。
4. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
37℃恒溫箱
植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。
濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
無
標準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
無
底物B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、1、2,、4,、8、16 U/L
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次。
植物乙酰輔酶A羧化酶合成酶（ACC）ELISA試劑盒操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加,。
除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標,，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值,。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0.1 U/L,。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。
6. 有效期：6個月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān),，本公司概不負責(zé),。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔(dān),。