化工儀器網(wǎng)
資料下載
B35 ；大鼠中樞神經(jīng)細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)
閱讀：164 發(fā)布時(shí)間：2017-9-14| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 7.9KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 43次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 164次 |
| 免費(fèi)下載 | 點(diǎn)擊下載 |
B35 ；大鼠中樞神經(jīng)細(xì)胞使用說(shuō)明書(shū)：
細(xì)胞名稱：B35 大鼠中樞神經(jīng)細(xì)胞
組織來(lái)源：神經(jīng)
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形 態(tài)：貼壁,；上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雙抗1%,。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二． B35細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若B35細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
2. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
3. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。
下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。
3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
B35 ；大鼠中樞神經(jīng)細(xì)胞注意事項(xiàng)：
1. 收到B35細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們,。
2. 先不開(kāi)瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，切忌在溫箱內(nèi)靜置過(guò)夜,。
3. 靜置后鏡檢，拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài),。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
4. 貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過(guò)80%,，可正常傳代,；若未超過(guò)80%，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,，瓶蓋可稍微擰松,。
5. 細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清,。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
6. 細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制,，
7. 因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程外因太多,，所以我們的售后保障期為一周，超過(guò)一周的細(xì)胞我們會(huì)酌情處理,，但不提供免費(fèi)更換服務(wù),。
B35細(xì)胞運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇,；（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到B35 ,；大鼠中樞神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。