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間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原和培養(yǎng)原理的概述
閱讀:673 發(fā)布時間:2017-7-13提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 4.4KB |
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間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原
通過流式細(xì)胞儀分析,,間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面抗原有:SH2,、SH3、 CD29、CD44,、CD71,、CD90、CD106,、CD120a,、CD124。
BMSC:是骨髓中除HSC 以外的非造血性干細(xì)胞,,骨髓中絕大多數(shù)是HSC,,BMSC 只占骨髓有核細(xì)胞的0.001%~0.01% 。因此鑒定BMSC 的方法是在骨髓的干細(xì)胞中排除HSC——BMSC:CD45-,、CD34-,、CD29+、 CD14+/ HSC:CD34+,。
間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)原理概述
間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,,MSC)是一群中胚層來源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞,在適宜的培養(yǎng)條件下可分化成多種組織細(xì)胞,,包括成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞,、脂肪細(xì)胞等,。
間質(zhì)干細(xì)胞zui早是從骨髓中分離得到的,正常情況下,,它在骨髓中的比例非常低,,僅占單核細(xì)胞的1/105 ~1/104 。骨髓中單個核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,,其體積,、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞密度較大,,為1.090 g/ml左右,,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml,。為此利用一種密度介于1.075~1.092 g/ml之間而近于等滲的溶液(分層液)進(jìn)行密度梯度離心,,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離,。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種,。
在骨髓的原代培養(yǎng)物中,除了貼壁生長的成纖維細(xì)胞樣的間質(zhì)干細(xì)胞外,,還混雜著一些巨噬細(xì)胞,、單核細(xì)胞、造血細(xì)胞及紅細(xì)胞等,要得到較均一的間質(zhì)干細(xì)胞,,必須除去其他細(xì)胞,。根據(jù)其他細(xì)胞的特性,可采用不同的方式排除它們,。對于紅細(xì)胞,,因其不貼壁,可通過換液除去,。對于貼壁的單核巨噬細(xì)胞,,可根據(jù)其黏附能力的不同,通過調(diào)整Trypsin/EDTA 的消化時間,,保證間質(zhì)干細(xì)胞在短暫的作用時間內(nèi)與塑料培養(yǎng)瓶壁分離,,而巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞,、造血細(xì)胞等仍貼附于培養(yǎng)瓶壁,,從而使間質(zhì)干細(xì)胞與其他的貼壁細(xì)胞得到分離。
在傳代培養(yǎng)中,,接種密度是影響體外培養(yǎng)間質(zhì)干細(xì)胞增殖潛能的重要因素,。低密度接種時,間質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力明顯提高,,而誘導(dǎo)細(xì)胞分化時則需要較高的細(xì)胞密度,,這可能與分化時細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用有關(guān)。而在培養(yǎng)過程中,,若細(xì)胞過度融合會促進(jìn)其分化趨向,,故要保持干細(xì)胞未分化狀態(tài),要及時傳代,。