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一,、懸浮細胞的分離方法
1、將血液,、羊水,、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘,。
2,、去掉上清，離心沉淀用無鈣,、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘,。此步重復兩次。
3,、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當細胞濃度后分瓶培養(yǎng),。
4,、如選用懸液中某種細胞，可采用離心后的細胞分層液收獲目的細胞,。
二,、實體組織材料的分離方法
（一）機械分散法
1、纖維成分很少的腦組織,，部分胚胎組織,，用剪刀剪碎至1mm3的組織塊。
2,、用PBS清洗兩次后
①用吸管吹打,，分散組織細胞。
②或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M織放在注射器內(nèi)（用九號針）,，使細胞通過針頭壓出,。
③或在不銹鋼紗網(wǎng)內(nèi)用鈍物（注射器鈍端）壓擠使細胞從網(wǎng)孔中壓擠出,。
3、收集細胞轉(zhuǎn)入離心管中,，1000rpm/分鐘離心5分鐘,。
4、去上清,，加入含血清的培養(yǎng)基,，重懸后移至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
（二）消化分離法
1,、酶消化分離法（過夜冷消化法）
①細胞間質(zhì)較少的軟組織,，如肝、腎,、甲狀腺,、羊膜、胚胎組織,、上皮組織等,，用Hanks液清洗組織三次，剪成碎塊大小為4毫米左右,。
②再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪組織,。
③加入0.25%的胰蛋白酶，搖勻后放4℃過夜,。
④次日再用Hanks液洗滌,，棄去上清，共洗2-3次,。
⑤加入少量含血清的培養(yǎng)基吹打分散,，細胞計數(shù)，按適當?shù)臐舛确制颗囵B(yǎng),。
2,、非酶消化法（EDTA消化法）
①把組織塊剪碎，呈1mm3大小的組織塊,。
②將碎組織塊在平皿中用無鈣鎂PBS洗2-3次,。
③加入消化液（胰蛋白酶或膠原酶或EDTA）于37℃水浴中作用適當時間（中間可輕搖1~2次），若組織塊膨松呈絮狀可終止,，若變化不大可更換一次消化液,，繼續(xù)消化直至膨松絮狀為止。
④棄去上清,，加入含有鈣,、鎂離子的培養(yǎng)基中止消化反應，并洗滌2-3次后,，加入*培養(yǎng)基,。
⑤用吸管吹打,，使細胞充分散開后用紗網(wǎng)過濾后分瓶培養(yǎng)。