日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

細胞生長的空間密度是細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵,。具體養(yǎng)細胞時應(yīng)該摸索細胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細胞瓶里的細胞因擁擠不堪而萎靡不振,；也不能讓細胞濃度低于1~5×10^5個/mL而導(dǎo)致“孤獨死”（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）,。因而細胞接種前，要先通過細胞計數(shù)來調(diào)整細胞濃度,。
當培養(yǎng)的貼壁細胞形態(tài)不好時,，可在傳代時,，先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清都可以）洗滌一次,，用滴管吸走,，再加入3ml培養(yǎng)基，沿著瓶底輕輕吹打一遍,，然后吸走,。這時在正式進行消化、吹打,。
其次,，把吹打下的細胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng),，按時間點觀察細胞貼壁情況（10min,，20min，30min）,。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基,，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次，然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細胞生長情況以及形態(tài),。直至找到細胞的形態(tài)為止,。
至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量，則是需要實驗汪們自己去摸索的,。對于生長快的細胞,，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基，細胞形態(tài)會更好,，但是要注意對換液時間的把握,。
如何選擇培養(yǎng)瓶。一般,，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞,，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好,。因此，對于同一種細胞,，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)）,，塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候,，玻璃瓶則相對會好一點,。
細胞凍存時，蓋子要擰緊，不然復(fù)蘇水浴時會滲水,，造成細胞污染,。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號的管子會有差別）,，蓋子擰緊后用封口膜封住,。且每支凍存管都要標上細胞的名稱、凍存時間,，并記錄在冊,，以免后續(xù)復(fù)蘇細胞時，取錯細胞,。
細胞凍存時要嚴格進行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）,。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會讓嬌弱的細胞自爆身亡，謹記：緩降溫,！但如果真心趕時間時,，可以使用細胞凍存盒進行細胞凍存，而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中,。此外,，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細胞全部浸在液面下,。
細胞解凍時,，由于凍存管管壁較厚、隔熱,，而導(dǎo)致水浴時間太長（2min還沒融化）時,，可以將水浴鍋的溫度調(diào)至40℃左右，可以縮短解凍時間,。
提前預(yù)定超凈臺,，減少復(fù)蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細胞房人滿為患,，超凈臺使用緊張,，復(fù)蘇1h后，還沒有加入新的培養(yǎng)液,。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶,，凍存時保護細胞，但復(fù)蘇融解后,，浸泡時間太久會對細胞有毒性）
復(fù)蘇細胞時一定要有耐心,，因為有些細胞在復(fù)蘇一星期后才會真正有起色。因而,，盡管細胞在復(fù)蘇三四天后沒有任何動靜,，也不要輕易倒掉所有細胞,，要耐心等待,，兩周后再做決定,。