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什么是溫育,？
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育,，在ELISA中似不恰當(dāng),。
溫育時間的講究：
ELISA屬固相免疫測定，抗原,、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn),。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。
溫育溫度的講究：
溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,，實(shí)驗(yàn)表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng),，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度,。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,，以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,，在ELISA中一般不予采用,。
溫育保溫的講究：
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴,，可將ELISA板置于水浴箱中,，ELISA板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上,。若用保溫箱,，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布,，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此,。無論是水浴還是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。室溫溫育的反應(yīng)，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育,。室溫溫育時,，ELISA板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的
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