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口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
使用說明書
【產品名稱】
通用名：口蹄疫A型抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒(注：酶標板不可拆)、96T×2/盒（注：酶標板一塊可拆,、一塊不可拆）
【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus,，FMDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性,、高度接觸性傳染病,，其特征為口腔黏膜、蹄部,、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑,。
本試劑用于檢測牛、羊血清中口蹄疫A型抗體,，可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果評價,。
【原 理】
本試劑盒系由預包被口蹄疫A型抗體的酶標板、抗體工作液,、抗原液酶標記物及其他配套試劑組成,，應用阻斷酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛、羊血清樣本中口蹄疫A型抗體,。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育,，樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原，阻斷抗原與板的結合,；經洗滌后,，再加抗體工作液孵育；經洗滌后加入酶標記物孵育,；再經洗滌除去未結合的酶標記物,，在孔中加底物液，與酶反應形成藍色產物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關,；加入終止液終止反應后，產物變?yōu)辄S色,；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格（96T×1） | 規(guī)格（96T×2） |
1. | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
3. | 抗體工作液 (藍蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
4. | 抗原液 (黑蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
5. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×2 |
6. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
9. | 陽性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
11. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
12. | 自封袋 | 1個 | 1個 |
13. | 說明書 | 1份 | 1份 |
【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備,，可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血、無污染,。樣品1周內可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存。
2.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。
3.用已稀釋的洗滌液將待檢血清按64倍稀釋（如5μl血清加入315μl洗滌液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復至室溫,。
2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。
3.陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl,，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl,；每孔再加入抗原液50μl（空白孔除外）。
注：加入抗原后樣本稀釋比例相當于1:128,。
4.震蕩混勻10秒,，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次,，拍干,。
6.每孔加抗體工作液50μl（空白孔除外），置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,，同步驟5,。
8.每孔加酶標記物50μl（空白孔除外），置37℃反應30分鐘,。
9.洗滌,，同步驟5。
10.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，37℃避光反應15分鐘,。
11.每孔加終止液50μl,，混勻，用空白孔調零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照A值≥1.0,，陽性對照A值≤50%×陰性對照A值,。
【檢驗結果的解釋】
1.PI（阻斷率）=（1-樣本A值/陰性對照孔平均A值）×100%，PI≥50%為陽性,；PI＜50%為陰性,。
2.本實驗檢測結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體，且效價高于1:128,，達到保護水平,。
3.本實驗檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體，或效價低于1:128,，未達到充足保護水平,。
4.如需了解樣本抗體的zui終效價，可將樣本進行梯度稀釋,，使PI≥50%的zui高稀釋比例即為該樣本抗體的zui終效價,。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性牛、羊血清中口蹄疫A型抗體,，根據PI值高低可作抗體水平強,、中、弱的粗略評估,。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,，使用時需恢復至室溫以*溶解,。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮,。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用,。
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