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樣本處理方法匯總表

一,、液體樣本

        液體樣本處理原則：所有的液體樣本,，用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，如果以后碰到其他的液體樣本,，也按這個(gè)方法,，納入?yún)R總表,。

1、血清：用無菌管收集,，室溫血液自然凝固10-20分鐘,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。

2,、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心,。

3、尿液：用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

4、胸腹水：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

5,、腦脊液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

6,、唾液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

7,、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

8、牛奶：用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

9、蜂蜜：用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

10、全血：用含有抗凝劑的無菌管收集,，立即輕輕搖動(dòng),，來回輕輕顛倒數(shù)次,，使血液和抗凝劑混勻，以防血液凝固,。

二,、固體樣本

        固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的合適緩沖液溶解,，分泌蛋白可以直接離心取上清檢測,，細(xì)胞內(nèi)的蛋白,，要先收集細(xì)胞,，再用合適方法破碎，離心取上清測試,。

1,、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g組織,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,。分裝一份待檢測，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織,，不好勻漿的話,，就在液氮中充分研磨；

2,、細(xì)胞內(nèi)蛋白樣本

許多待測蛋白不是分泌蛋白,，而是存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白，這個(gè)時(shí)候,，要先收集細(xì)胞,，洗滌干凈，再破碎細(xì)胞,，離心取上清,。

（1）培養(yǎng)的細(xì)胞

A、動(dòng)物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,，使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融（如果反復(fù)凍融，破碎效果不好,，就采用超聲波破碎）,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

B,、植物細(xì)胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液,，使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，置于冰盒上,，用超聲破碎儀,，設(shè)置破碎2s，冷卻30s的方式,，充分破碎細(xì)胞,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

（2）組織的細(xì)胞

切割標(biāo)本后,，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），去除上清,，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細(xì)胞三遍,。再用上述的細(xì)胞破碎方法破碎細(xì)胞。

3,、土壤：稱取1g土壤,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標(biāo)本充分混勻,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測,，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。如果是測分泌蛋白,，直接取上清檢測，測試細(xì)胞內(nèi)蛋白,，要破碎細(xì)胞,。

4,、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部,，搖勻,，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,。分裝一份待檢測，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,，直接取上清檢測,，測試細(xì)胞內(nèi)蛋白，要破碎細(xì)胞,。

6.植物標(biāo)本中相關(guān)酶或蛋白的測定：（粗提取）
1,、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心ィ?/span>
2,、 加入樣品體積9倍的提取液（pH 7.4 PBS緩沖液）,

3、 請(qǐng)于4度,，8000rpm,，離心30分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4度待用,。

三,、樣本收集注意事項(xiàng)

1、不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2、標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3,、我們羅列的是通用的樣本處理方法，無法涵蓋各種樣本,，對(duì)于一些特殊樣本,，建議實(shí)驗(yàn)人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn)，自行設(shè)計(jì)合理的樣本處理方法,。

計(jì)算方法示例：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中,，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值,。將樣本的OD值為X值代入方程式，所得的Y值即是我們的樣本值,。（如上圖所示）