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大鼠瘦素ELISA試劑盒洗板方法
ELISA試劑盒
標(biāo)本：血清,、血漿,、細(xì)胞上清液、尿液,、體液,、灌洗液、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。
種屬：人,、大鼠、小鼠,、兔子,、豬、犬,、猴,、馬、牛,、羊,、雞、鴨,、魚等,。
用途：科研實驗等領(lǐng)域科學(xué)研究，不得用于臨床診斷.
特點：靈敏性高,、特異性強,、重復(fù)性好.
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：6瓶,。
3. 生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶,。
4. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶,。
7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗C3抗體,、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成z終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，計算樣品濃度,。
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
4. 樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍。
ELISA試劑盒操作注意事項：
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9）按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作
