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有效期:6個月
保存條件:2-8℃
樣本處理及要求
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,,但應避免反復凍融,。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融,。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測,,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融,。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,,并得到直線回歸方程,,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度,。
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標準品孔di一孔的OD 值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,,計算時請z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 試劑盒2-8℃冷藏,,保質(zhì)期6個月