高鐵血紅蛋白檢測,，大鼠(MHB)ELISA試劑盒（一步法）

英文名稱：Rat MHB ELISA Kit
實(shí)驗(yàn)類型：夾心法
檢測范圍：0.75 ug/mL - 24 ug/mL
低檢測限：0.1 ug/mL
應(yīng)用范圍：血清、血漿,、組織勻漿,、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度,。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。

6. 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品,。

10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。