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ELISA間接法不能直接用酶標(biāo)記的原因何在?

2019-3-5  閱讀(1523)

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在ELISA實(shí)驗(yàn)中,,用間接法測(cè)定抗體,,不能直接將待測(cè)抗體直接用酶標(biāo)記,然后直接加底物,。而要加酶標(biāo)抗抗體呢,?


如果將酶標(biāo)記到待測(cè)抗體上,相對(duì)經(jīng)典的間接法更加繁瑣,,而且您在摸索標(biāo)記條件時(shí)不能保證操作失誤導(dǎo)致待測(cè)抗體失活,;酶標(biāo)二抗現(xiàn)在是已經(jīng)商品化了的,被大規(guī)模生產(chǎn),,購買后使用方便,。如果你的間接做的好的話,方法被優(yōu)化了后,,一抗二抗顯色,,總共的時(shí)間加起來,出結(jié)果不會(huì)超過2-3小時(shí),。


可以用直接ELISA法,,就是用抗體包板,在抗原上標(biāo)記酶,然后顯色,,這樣與間接法相比就減少了一步,,縮短了時(shí)間。


但是,,直接法和間接法,,他們各有優(yōu)缺點(diǎn),需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求而定,。
1,、待測(cè)抗體一般是免疫后產(chǎn)生的抗體,其中有免疫失敗和抗體過少等因素存在,,用酶標(biāo)記有許多不確定性,,如用酶標(biāo)記前期有測(cè)不出效價(jià)的可能,造成不必要的困惑,。


2,、ELISA酶聯(lián)免疫中酶標(biāo)抗抗體和抗體結(jié)合后有巨大的信號(hào)放大作用,可以將信號(hào)擴(kuò)大千倍以上,,適合于較低抗體量的測(cè)定,。


3、ELISA試劑盒SCI文章篩出單抗后可以考慮直接酶標(biāo)抗體,,不過在確定測(cè)定體系上要費(fèi)不少功夫,。

 

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