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推薦一個大鼠甲狀旁腺素含量檢測方法-ELISA實驗
大鼠甲狀旁腺素(PTH)ELISA試劑盒僅供研究使用
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被大鼠甲狀旁腺素（PTH）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠甲狀旁腺素（PTH）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
大鼠甲狀旁腺素(PTH)ELISA試劑盒性能
1. 檢測范圍：1.25 pg/mL – 40 pg/mL,。
2. 靈敏度：低檢測濃度小于0.1 pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構類似物交叉反應,。
4. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15% 。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
