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大鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒
英文名稱：Rat ROS ELISA Kit
實驗類型：夾心法
檢測范圍：15 U/mL – 480 U/mL
低檢測限：1.0 U/mL
應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿,、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途）
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被大鼠活性氧簇（ROS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠活性氧簇（ROS）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。
大鼠活性氧簇(ROS)ELISA試劑盒組成
| 試劑盒組成 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
|---|---|---|---|
| 微孔酶標板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
| 標準品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 無 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
| 20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 無 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 無 |
| 終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
| 封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
| 自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注：
1. 標準品濃度依次為：480,、240、120,、60,、30,、0 U/mL
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗,。
樣本處理及要求
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標本溶血會影響后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4. 除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品,。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次,；將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次,。
自動洗板：如果有自動洗板機,，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。
（此圖僅供參考）
