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本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定豬血清,、血漿,、組織勻漿及相關液體樣本中繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）的含量,。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）水平,。用純化的豬繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入豬繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）,，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的豬繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管激素（MIS;AMH）含量,。
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
|
封板膜 | 2片 | 2片 |
|
密封袋 | 1個 | 1個 |
|
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：標準品濃度依次為：8,、4、2,、1,、0.5、0 ng/mL.
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心,。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
- 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；。
- 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
- 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外,。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
- 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
- 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋
倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值
代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上,。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應分別小于10%和15% 。
檢測范圍：
0.25 ng/mL - 8 ng/mL
靈敏度：
zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃,。
2．有效期： 6個月
