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l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人銅鋅過氧化物岐化酶（SOD1）的含量。
l 有效期：6個月
l 保存條件：2-8℃
l 本試劑盒僅供科研使用,，不得用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被人銅鋅過氧化物岐化酶（SOD1）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人銅鋅過氧化物岐化酶（SOD1）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×8條
無
標準品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進行稀釋
底物A
6mL
3mL
無
底物B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
備注：
1. 標準品濃度依次為：4000,、2000,、1000、500,、250,、125 pg/mL
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗,。
注意事項
嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值。
底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
在儲存和溫育時避免強光直接照射,。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
不能使用過期產(chǎn)品,。
如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；
樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度,。
試劑盒性能
檢測范圍：125 pg/mL – 4000 pg/mL,。
靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/mL。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,，板間變異系數(shù)小于15% ,。
