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上海仁捷生物科技有限公司
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一,、服務(wù)
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要，比如在檢測(cè)范圍,、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,，而量身定制檢測(cè)試劑盒，有效控制檢測(cè)試劑成本,。并可提供免費(fèi)代測(cè),。
二、ELISA檢測(cè)概述
ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。
實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種,。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等,。目前我們對(duì)客戶(hù)提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù),。
三、技術(shù)流程
| 雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原) | 間接法(檢測(cè)未知抗體) |
| 1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次。 2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔),。 3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌,。 4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。 5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。 | 1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml,，4℃過(guò)夜,。次日洗滌3次。 2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。(同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照) 3、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。 4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。 5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性,。 |
四、客戶(hù)須知
1,、液體類(lèi)標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿、血清,、血漿,、尿液、胸水,、腹水,、腦脊液等）；
2,、樣本保存：請(qǐng)盡早檢測(cè),，2-8℃保存一天；需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本,，請(qǐng)將樣本及時(shí)分裝標(biāo)號(hào)后,，置-20℃或-70℃保存；
3,、請(qǐng)?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬,、樣本數(shù)量、待測(cè)指標(biāo)及其他特殊要求,。
五,、報(bào)告內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)
1、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,；
2,、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟；
3,、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材,，實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明）,；
4,、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行階段，我公司客服人員會(huì)及時(shí)向您匯報(bào)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,。
