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制備好免疫膠體金后,，還需要將其稀釋到一定濃度,，并吸附于特殊的惰性介質(zhì)中才能夠zui終制成產(chǎn)品,。一般來(lái)說(shuō),，特殊的介質(zhì)常用的是玻璃纖維或無(wú)紡布,。玻璃纖維和無(wú)紡布本身一般是疏水的,，膠體金產(chǎn)業(yè)一般采用表面活性劑預(yù)處理過(guò)的玻璃纖維或無(wú)紡布,，通常配方為1%Tween20+適量PVA。介質(zhì)處理完成后,，免疫膠體金稀釋液的配伍才是zui關(guān)鍵的?，F(xiàn)總結(jié)原則如下：
1、合適的離子種類和強(qiáng)度
免疫膠體金畢竟是含有生物活性分子,，應(yīng)用時(shí)還要面對(duì)千差萬(wàn)別的樣品,，原則上需要稀釋在合適PH的緩沖液中。經(jīng)驗(yàn)值是6-9,。在這個(gè)范圍內(nèi)可選的緩沖主要有Tris和PB,，也不排除其他種類緩沖適用的可能。當(dāng)使用的緩沖離子強(qiáng)度過(guò)大如超過(guò)0.2M時(shí),，有可能造成釋放,、層析不好或檢測(cè)結(jié)果異常。離子的種類也因?yàn)槊庖吣z體金的生物分子不同而有諸多限制,，例如鈣調(diào)蛋白可能與Ca2+離子有關(guān)系,。而鹵素離子強(qiáng)度對(duì)膠體金穩(wěn)定性似乎有特殊的破壞作用，教科書式的NaCl調(diào)試zui適標(biāo)記條件就是例子,。
2,、大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架
這個(gè)其實(shí)是凍干工藝的理論基礎(chǔ)，適用于膠體金干燥工藝,，對(duì)凍干有研究的應(yīng)該對(duì)這個(gè)工藝感覺很小兒科,。抽真空是一個(gè)熱力學(xué)吸熱過(guò)程,，實(shí)驗(yàn)表明免疫膠體金的真空干燥是一個(gè)先冷凍再升華的過(guò)程，十分類似凍干,。無(wú)紡布材料的工藝由于干燥過(guò)程快,，多數(shù)采用烤干的工藝，但是大分子的骨架作用仍然是對(duì)產(chǎn)品的釋放速度和比率有很大幫助,。常用大分子物質(zhì)如PEG4000,、PEG20000、PVP等,，建議盡量從中選擇一種添加使用,。
3、小分子物質(zhì)對(duì)蛋白活性保護(hù)
蛋白儲(chǔ)存常用的甘油,、蔗糖,、海藻糖、各類低聚糖等,，對(duì)產(chǎn)品的儲(chǔ)存穩(wěn)定性有幫助,，忽略這部分物質(zhì)的添加可能限制產(chǎn)品從實(shí)驗(yàn)室走生產(chǎn)和市場(chǎng)。這類物質(zhì)也是凍干細(xì)胞常用的,。
4,、惰性蛋白
這類物質(zhì)的功能就更復(fù)雜。首先還是保護(hù)目的蛋白的活性,，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定,，它們是消除非特異性的封閉物質(zhì)，也起著有分散膠體金顆粒的骨架作用,。常用有BSA,、OVA、Casein,，其他廉價(jià)蛋白似乎不太好找,，脫脂奶粉個(gè)人建議不用，質(zhì)量太難控制了,，當(dāng)然如果大家已經(jīng)在用而且效果不錯(cuò),，也沒有必要過(guò)于擔(dān)心。
5,、表面活性劑
這個(gè)東西在這個(gè)產(chǎn)業(yè)里可是萬(wàn)萬(wàn)不能缺少,，但是吸附材料已經(jīng)用表面活性預(yù)處理的，也可以不拘泥于添加在免疫膠體金稀釋液里,。一般情況下,，Tween20就可以了，其實(shí)蛋白質(zhì)復(fù)性常用的非離子型表面活性劑都可以一試,，前一段時(shí)間某位高人說(shuō)TritonX-100等可能會(huì)干擾蛋白的N末端建議不要用,，我聽了不是很理解,，在這里請(qǐng)高人指點(diǎn),。
6,、其它
產(chǎn)品種類千差萬(wàn)別，以上5類物質(zhì)外,，傳說(shuō)還有一些可以“提高產(chǎn)品敏感性”,、“提高產(chǎn)品檢測(cè)線性范圍”、“強(qiáng)制轉(zhuǎn)換**檢測(cè)*cut-off范圍”,、“HAMA效應(yīng)抑制”和”線條規(guī)定時(shí)間深度變化終止“等神秘添加物,，從理論上不排除存在的可能，但是往往一種“神物”有效的范圍十分狹窄,，也就是說(shuō)一種“神物”可能只適用于一個(gè)公司一種抗體的一個(gè)產(chǎn)品,，換個(gè)環(huán)境就無(wú)效了。尋找神物的工作往往是研發(fā)型的大公司的資深技術(shù)人員,，而對(duì)神物的控制往往也是如同企業(yè)一級(jí)機(jī)密,。
