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在臨床檢驗(yàn)中一般采用商品試劑盒進(jìn)行測定,，ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等,。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;
(6)洗滌液;
(7)酶反應(yīng)終止液,。
免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上,。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,，檢測人員需自行包被,。以下簡述固相載體和包被過程。
固相載體
固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,，不參與化學(xué)反應(yīng),。可作ELISA中載體的材料很多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,，加之它的價格低廉,，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式,。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管,。以微量滴定板zui為常用,，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同,。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,，并可在特制的比色計上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,，包括加樣,、洗滌、保溫,、比色等步驟,，對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測抗體時空白值較大,。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高,，各板之間,、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近,。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此,，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能,。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,，保溫后洗滌,，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后,，分別測每孔溶液的吸光度,。控制反應(yīng)條件,，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右,。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,，應(yīng)小于10%,。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,，可剪割,，價廉，但光潔度不如聚苯乙烯板,，孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高,。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后,，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測定,，然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大,，這種載體就是這一ELISA測定項(xiàng)目的zui合適的固相載體,。
在ELISA中，用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加,。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2，小珠均為1000mm2,，將近ELISA板孔的5倍,。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏,。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*,，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好,。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較差,。
