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一、BrainBits星形膠質(zhì)細胞全腦培養(yǎng)試劑盒內(nèi)容
該試劑盒內(nèi)含：1 E18小鼠全腦,、12mL NbAstro,、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca ,、1個帶橡膠球的火拋光移液,、1對PDL涂層蓋板
二、BrainBits星形膠質(zhì)細胞全腦培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品簡介
該試劑盒包含從新鮮組織開始培養(yǎng)所需的一切,。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲存介質(zhì)運送,。立即使用組織以獲得最高的細胞產(chǎn)量，但組織可在4-8°C下保存一周,。這個試劑盒是完mei的研究人員剛剛開始或為那些誰想要的可靠性,。非常適合課堂教育，為下一代研究人員提供實踐方法,。
三,、產(chǎn)品操作
（1）細胞分散（無菌操作箱中的室溫）
A、用 2 毫升移液管小心地將組織轉(zhuǎn)移至木瓜蛋白酶中,，盡量減少培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)移,。將 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至一個新的無菌 15 毫升管中，以備第三步使用,。
B,、將組織和木瓜蛋白酶在30℃下孵育 10 分鐘。每 2 分鐘輕輕攪拌一次,，或者使用加熱振蕩板,，溫度為30℃，轉(zhuǎn)速為 150 轉(zhuǎn)/分鐘,。
C,、用 2 毫升移液管從木瓜蛋白酶中取出含有少量培養(yǎng)基的組織，并返回步驟 A中的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基中,。
D,、使用涂有硅油的巴斯德移液管，研磨組織不超過 10 次,，或分散 90%的組織,，避免產(chǎn)生氣泡。
E,、讓未分散的顆粒靜置 1 分鐘,。可選：向細胞懸液中加入 400 微升 1 毫克/毫升的 DNase I 溶液,，并在室溫下孵育 15 分鐘,，每 5 分鐘輕輕攪拌或搖晃試管。
F,、將含有分散細胞的細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌的 15 毫升管中,。留下約 50 微升含有碎片的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基?？蛇x：通過 70 微米的細胞過濾器過濾細胞溶液,。
G、以 1100 轉(zhuǎn)/分（200×G）離心 1 分鐘,。棄去上清液,，留下約 50 微升含有沉淀物的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基。
H,、分散細胞團（用手指或試管輕彈管底）,，然后將細胞團重新懸浮于 1 毫升的星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基（NbAstro™）中。
I,、將 20 微升細胞溶液分裝到含有 80 微升臺盼藍（1:5 稀釋）的 0.5 毫升管中,。
J、使用血細胞ji數(shù)器（計算細胞/毫升）或采用當前的實驗室程序來計數(shù)細胞,。 （2）細胞培養(yǎng)（無菌室中的室溫）
A,、用 0.2 毫升/平方厘米的 NbAstro™ 稀釋細胞，并以 7500 個細胞/平方厘米或期望的濃度進行鋪板,。注意：以更高的密度鋪板會導致神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞的混合,。
B,、孵化時間37 ℃,、5%的二氧化碳2、9%的氧氣2,、95%的濕度（或環(huán)境濕度O2 )）
C、 每 3 - 4 天用新鮮的,、37℃,、二氧化碳平衡的 NbAstro 更換一半的培養(yǎng)基,。
D,、1.5 至 2 周后,，星形膠質(zhì)細胞將有 90%融合,，準備收獲或傳代。
E、若要轉(zhuǎn)移到神經(jīng)元培養(yǎng)物中：提前 24 小時，將一半的培養(yǎng)基更換為 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™（NbActiv1™）,。
F、對于擴增：用 0.25%胰蛋bai酶在 THRYVE 胚胎培養(yǎng)基中收獲細胞,，(37 ℃,，5 分鐘）。
G,、若要抑制胰dan白酶，請使用dan蛋白酶抑制劑或血清,。
（3）活力測定：
A,、用 37 ℃平衡yan溶液（0.2 毫升/平方厘米底物）沖洗兩次,。
B、從 15mg/ml 熒光素二乙酸酯的丙酮儲備液和 4.6mg/ml 碘化丙啶的水溶液儲備液中制備染色液，將每種溶液稀釋 15 微升至 1.5 毫升的 HBSS 中（1:100 稀釋）。
C、將步驟 B 中的 20 微升染料混合物添加到步驟A中添加的每 0.2 毫升的 HBSS 中（1:10 稀釋）。
D、約 1 分鐘后，使用適合熒光素熒光的藍色激發(fā)來計數(shù)活細胞（綠色細胞）,。使用綠色激發(fā)來計數(shù)碘化丙啶熒光（小紅色細胞核）的死細胞,。
E,、活力 =（綠色細胞/單位面積）/（單位面積上鋪板的總細胞數(shù)） 或者存活率 = 綠色細胞/（綠色細胞 + 紅色細胞）
