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產(chǎn)品名稱：PRECEDO原代腸癌培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）
產(chǎn)品說明：PRECEDO原代腸癌培養(yǎng)基（Human intestine Carcinoma Cell Medium）是一種為促進人源腸癌原代細胞體外生長而開發(fā)的培養(yǎng)基,。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸,、維生素,、有機和無機化合物、激素,、生長因子,、微量礦物質(zhì)等。培養(yǎng)基基于碳酸氯鹽的緩沖體系,，在5%CO2,、37℃培養(yǎng)箱中平衡時，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想人源腸癌原代細胞體外培養(yǎng)環(huán)境,，選擇性地促進體外人源腸癌原代細胞的生長,。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明：
?使用前準備
（1）預冷的DMEM/F12培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠（Corning#356231）（50倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用）,，并取適量*覆蓋培養(yǎng)容器,，在5%CO2 37℃包被培養(yǎng)容器底部0.5~3h，使用時棄上清,。
（2）15mL無菌離心管,、移液器、移液管,、無菌槍頭等表面75%酒精消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min從4 ℃冰箱取出*培養(yǎng)基平衡至室溫,。
?腸癌原代細胞培養(yǎng)
（1）至少提前半小時使用稀釋后的基質(zhì)膠預鋪培養(yǎng)瓶/板，使用前吸棄基質(zhì)膠,，用稀釋液潤洗一遍,。
（2）將分離并計數(shù)后的細胞懸液參考表1中細胞數(shù)量接種于培養(yǎng)瓶/板，補加*培養(yǎng)基至所需體積,，輕輕搖晃混勻,，75%酒精表面消毒后放置培養(yǎng)箱，37℃,、5%CO2培養(yǎng),。
（3）原代細胞初次接種后2-3天內(nèi)勿動（利于細胞貼壁），第一次換液建議換半液,。
?腸癌原代細胞傳代
（1）鏡下觀察細胞形成克隆,，且匯合度85~95%時即可傳代。
（2）培養(yǎng)箱中取出細胞,，棄舊培養(yǎng)液,，0.05%yi-mei洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%yi-mei,，37℃孵育,，2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細胞消化情況,。
（3）細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養(yǎng)基終止消化,，并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中，1500 rpm, 3min,。
（4）棄上清,，以1~5mL條件培養(yǎng)基重懸細胞，活細胞計數(shù),，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,，（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積,、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1所示）,，補加培養(yǎng)基至所需體積,，十字交叉混勻，培養(yǎng)容器75%表面消毒后置37℃,、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),。其他步驟同上。
注意事項：
（1）本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫,。
（2）使用產(chǎn)品時應注意無菌操作,，避免污染。
（3）本產(chǎn)品中不含血清,，含有原代細胞專用抗生素,，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,，可直接使用,。
（4）樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%）,，培養(yǎng)成功率越高,。
（5）為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中,。
（6）請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,，超出保質(zhì)期，必須放棄使用,。
（7）傳代消化時切記不要消化過度,，不宜超過5min，對細胞造成損傷,，影響細胞狀態(tài),。
（8）本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷,。
