一,、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍結構

考馬斯亮藍R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學形式，結構上R-250比G-250少了2個甲基,。命名上“R"為Red的縮寫，因R-250的藍色染料呈微紅色；命名上“G"為Green 的縮寫,，因G-250的藍色染料泛淺綠色，也稱為膠體考馬斯亮藍（見下文）,；“250"表示考馬斯亮藍的純度,。

其中R-250因少兩個甲基，與蛋白質(zhì)反應比較緩慢,，染色耗時較長,，但是容易被洗脫下去，所以常用作凝膠電泳中蛋白質(zhì)條帶染色的基礎染料,。而G-250因為多兩個甲基,，與蛋白質(zhì)的結合反應十分迅速，且形成有色復合體較為穩(wěn)定,，不容易洗脫,，常用于蛋白定量的Bradford 法測定試劑,；也可染膠，但其脫色時間較長,、脫色困難,，背景較高，長時間在水中脫色容易使凝膠吸水膨脹甚至破碎,。

二,、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色蛋白質(zhì)染料要求

用染料和生物大分子結合形成有色的復合物是電泳后檢測的方法。選用染料通常應考慮以下要求：
1. 必須與大分子結合以形成一個不溶性的,，有色的,，緊密的復合物，但不結合到凝膠中和支持膜上,，以便從凝膠中除去,，否則高背景會影響蛋白帶的辨別和定量掃描。
2. 染料必須容易溶解在對大分子沒有影響的溶劑中,，以利于背景的脫色,。
3. 選用高吸光系數(shù)的染料有利于提高定量測定的靈敏度。
4. 選用能與大分子有專一性結合的染料,，并在結合后能產(chǎn)生不同的顏色（如熒光),，可以提高檢測的選擇性和靈敏度。

早期用于蛋白染色的染料是氨基黑10B,，是一種含有兩個磺酸基團的酸性重氮化合物,，所以能與堿性氨基酸殘基結合進而實現(xiàn)蛋白質(zhì)染色。但其對SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好,；此外,，氨基黑10B對不同蛋白質(zhì)染色時，著色度不等,、色調(diào)不一(有藍,、黑、棕等),；染色靈敏度低,，進行凝膠定量掃描時，誤差較大,。 考馬斯亮藍染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物,，每個分子也含有兩個磺酸基團，也能與堿性氨基酸殘基結合進而實現(xiàn)蛋白質(zhì)染色,，其次,，還可通過染料的疏水性殘基和蛋白質(zhì)的疏水性區(qū)域的作用產(chǎn)生疏水性力，同時也存在氧鍵和范德華力的作用,?？捡R斯亮藍染色靈敏度比氨基黑高5倍， 并且適用于SDS-PAGE電泳微量蛋白質(zhì)染色,，此外與不同蛋白結合呈現(xiàn)基本相同的顏色,，并且在比較寬的范圍內(nèi) ，掃描峰的面積與蛋白量有線性關系,。

三,、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色考染的應用

考馬斯亮藍又稱為Bradford法，是一種常用的蛋白定性定量分析方法,。其主要利用Coomassie Brilliant Blue G-250這種酸性染料與蛋白質(zhì)在酸性環(huán)境下產(chǎn)生吸附,導致染料的最大吸光波長從465 nm變?yōu)?/span>595 nm,。通過制備不同濃度的牛血清白蛋白標準品液,與Bradford試劑混合后測定其595 nm吸光度值,繪制標準曲線。與標準品同量的樣品蛋白溶液與Bradford試劑混合,。5 min后在595 nm波長下測定各樣品與標準品的吸光度,。根據(jù)標準曲線,計算出各樣品的蛋白濃度。

此外,，考馬斯亮藍（Coomassie Brilliant Blue）與麗春紅染色一樣,，也是WB實驗中常用的染色方法。通常情況下考馬斯亮藍用于染SDS-PAGE凝膠以評估電泳和轉(zhuǎn)膜條件是否合適（在電泳完成后染色可以根據(jù)凝膠上條帶的位置形狀初步判斷蛋白的遷移情況,；在電轉(zhuǎn)完成后進行該染色可初步判斷蛋白是否有殘留,，幫助實驗人員判斷轉(zhuǎn)膜條件是否合適），而麗春紅染色則主要用于染膜以初步評估轉(zhuǎn)膜效率及不同組間蛋白表達情況,。

四,、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍染色步驟

（1）電泳結束后，將膠板取出放入加有超純水的平皿中潤洗,，以去除殘留電泳液,。

（2）之后加入考馬斯亮藍染液浸沒，放至水平搖床室溫30 min或更長時間進行染色（具體根據(jù)凝膠厚度和溫度進行調(diào)整）,，直至凝膠與染色液顏色十分接近,。

（3）棄去染色液或回收染色液（可回收使用3次左右）。

（4）脫色直至背景清晰,。

五,、Solarbio索萊寶WB-考馬斯亮藍部分產(chǎn)品表

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