MLPA技術(shù)，即多重連接探針擴(kuò)增技術(shù),，于2002年首先報道,，是近幾年發(fā)展起來的一種針對待檢DNA序列進(jìn)行定性和半定量分析的新技術(shù)。該技術(shù)高效,、特異，在一次反應(yīng)中可以檢測45個核苷酸序列拷貝數(shù)的改變,，已經(jīng)應(yīng)用于多個領(lǐng)域,、多種疾病的研究,。下面讓我們一起來看看MLPA技術(shù)的試驗(yàn)原理吧！

在MLPA實(shí)驗(yàn)中,，純化的樣本DNA被變性,。之后用MLPA探針寡核苷酸孵育過夜。每個MLPA探針都具有針對特定基因組序列的探針,。每對MLPA探針包括兩條單鏈DNA:左側(cè)探針和右側(cè)探針寡核苷酸,。簡稱分別是LPO和RPO。LPO和RPO包含PCR引物和DNA雜交序列,。

在MLPA反應(yīng)中,，左探針寡核苷酸（LPO）和右探針寡核苷酸（RPO）都與靶序列進(jìn)行雜交，之后使用連接酶連接兩部分探針,。

將雜交的探針寡核苷酸連接到鄰近的目標(biāo)序列,。探針連接產(chǎn)物的數(shù)量是樣品中目標(biāo)序列數(shù)量的度量。連接反應(yīng)具有高度特異性,，連接部位周圍沒有錯配,。

使用單個通用引物對在多重PCR中擴(kuò)增連接的探針。只有連接的探針呈指數(shù)級擴(kuò)增,，使得不需要去除未連接和未連接的探針,。

再通過毛細(xì)管電泳進(jìn)行片段分離，通過MRC Holland的分析軟件進(jìn)行分析得出結(jié)論,。PCR產(chǎn)物裝載到毛細(xì)管電置上,，按長度分離。每個片段對應(yīng)一個特定的MLPA探針,。

MLPA結(jié)合了DNA探針雜交和PCR技術(shù),，不僅可以用來檢測與疾病相關(guān)的CNV（?拷貝數(shù)變異）?，?例如遺傳性乳腺癌,、?結(jié)腸癌,、?杜氏肌營養(yǎng)不良等，?還可以用于腫瘤中的CNV檢測,，?以優(yōu)化腫瘤分型,。任何技術(shù)都有其優(yōu)缺點(diǎn)。

優(yōu)點(diǎn)：

1,、高效：一次反應(yīng)可以檢測45個靶序列拷貝數(shù)的改變,。

2、特異：可以檢測點(diǎn)突變,。

3,、快速：一次實(shí)驗(yàn)可以在24小時內(nèi)完成。

4,、簡便：不同的試劑盒操作基本相同,，容易掌握,。

缺點(diǎn)：

1、需要精確測量DNA的濃度,，樣本容易被污染,。

2、不能用于單個細(xì)胞的檢測,。

3,、MLPA用于檢測基因的缺失或重復(fù)，不適合檢測未知的點(diǎn)突變類型,。

4,、不能檢測染色體的平衡易位。