流式細(xì)胞術(shù)的測定對(duì)象是單細(xì)胞或單個(gè)微粒，在FCM技術(shù)中能夠制備出合格的單細(xì)胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié),，單細(xì)胞懸液來自于動(dòng)植物的不同組織器官,，也可來自于非生物樣品，F(xiàn)CM中大多數(shù)為生物樣品,，生物樣品主要來源于培養(yǎng)細(xì)胞,、血液、新鮮實(shí)體組織以及石蠟包埋組織等,，不同的組織有不同的單細(xì)胞分散方法,，因此建立切實(shí)可行的FCM單細(xì)胞懸液的具體制備方法，在流式細(xì)胞分析中至關(guān)重要,。那么你知道流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備方法都有什么嗎,？讓我們一起來看看吧！
 

　　一,、酶消化法
 

　　酶的作用原理主要有三方面：一是破壞組織間的膠原纖維,、彈性纖維等,，二是水解組織細(xì)胞的緊密連接結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，三是水解組織間的粘多糖物質(zhì),。酶消化法是實(shí)體組織分散為單細(xì)胞的主要方法之一,。
 

　　二、機(jī)械法
 

　　機(jī)械法分散實(shí)體組織包括:用剪刀剪碎組織或用鋒利的解剖刀剁碎組織,，用勻漿器勻漿,，用細(xì)注射針頭反復(fù)抽吸細(xì)胞等，最后用300目尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞得到單細(xì)胞懸液,。
 

　　三,、化學(xué)處理法
 

　　化學(xué)處理法的主要原理是:將組織細(xì)胞間起粘連作用的鈣、鎂離子置換出來,，從而使細(xì)胞分散下來,。
 

　　四、注意事項(xiàng)：
 

　　1. 需要注意的是酶學(xué)方法的使用條件和影響因素(如酶濃度,、酶效價(jià),、作用時(shí)間、pH值)等,，例如胃蛋白酶在堿性環(huán)境下失去活性,、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
 

　　2. 采用網(wǎng)搓法同樣也可獲得大量細(xì)胞,，但機(jī)械法容易造成細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)快,，因此常與其他方法配合使用。
 

　　3. 新鮮組織標(biāo)本應(yīng)及時(shí)處理保存,，避免細(xì)胞自溶導(dǎo)致DNA降解,。
 

　　4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇最佳固定方式;如采用酶學(xué)法需注意酶的溶劑、消化時(shí)間,、pH值,、濃度等，同時(shí)根據(jù)組織成分合理選用酶類,，例如含大量結(jié)締組織腫瘤,，如食管癌、乳腺癌,、皮膚癌等應(yīng)選擇膠原酶,。
 

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