碧云天脂質氧化MDA檢測試劑盒(S0131S) (Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用MDA和TBA反應生成紅色產物的顯色反應,，通過比色法定量檢測血漿,、血清、尿液,、動植物組織或細胞裂解液中的MDA含量,。該試劑盒廣泛應用于脂質氧化水平的檢測。

MDA是生物體脂質氧化的自然產物,，在氧化應激時產生,。脂質氧化導致脂肪酸逐漸分解為多種化合物，包括MDA,。通過檢測MDA水平,，可以評估脂質氧化程度，因此MDA測定被廣泛應用于脂質氧化的評估,。雖然生物體內其他生化反應也會產生MDA,，例如thromboxane synthase的催化作用，但通過適當的對照設置,，可以準確觀察脂質氧化水平的變化,。

本試劑盒中采用了特殊的抗氧化劑，可以有效地抑制樣品在檢測過程中產生新的MDA,，使檢測更加準確,。同時本檢測試劑盒在檢測過程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA，使對脂質氧化的測定更加準確,。

本試劑盒可以檢測低達1μM的MDA,，也可檢測高達200μM的MDA。血漿,、血清樣品中的MDA含量通常在約2-4μM,，尿液中的MDA含量通常在約5-30μM，在本試劑盒的檢測范圍內,，可以直接用本試劑盒檢測血漿,、血清、尿液樣品等,。

使用說明：

1. 樣品的準備：

a. 血漿,、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測定,。

b.對于組織，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%,；對于細胞,，每100萬細胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后,，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測定,。對于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的,，可以使用0.2微米孔徑的過濾器過濾以獲得澄清的樣品溶液,。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進行操作。

c. 對于組織或細胞樣品,，樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內的MDA含量,。

2. 試劑盒的準備工作：

TBA儲存液的配制：稱取適量TBA,，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制,，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制,，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用,，可以加熱到70℃以促進溶解,。TBA儲存液較難溶解，需加熱到70℃,，并通過劇烈Vortex以促進溶解,。配制好的TBA儲存液室溫避光保存，至少3個月內有效,。

標準品的稀釋：取適量標準品用蒸餾水稀釋至1,、2、5,、10,、20、50μM,，用于后續(xù)制作標準曲線,。如果樣品中MDA的濃度很高，可以增加100,、150和200μM的標準品濃度,。

3. 樣品測定:

a. 在離心管或其它適當容器內加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當溶液作為空白對照,，加入0.1ml上述不同濃度標準品用于制作標準曲線,，加入0.1ml樣品用于測定,；隨后加入0.2ml MDA檢測工作液。

b. 混勻后,，100℃或沸水浴加熱15分鐘,。加熱時務必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進行加熱注意用重物壓緊離心管蓋,；如果使用沸水浴,，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口,，用針頭刺一小孔,。zui方便和準確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。
c. 水浴冷卻至室溫,，1000g室溫離心10分鐘,。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標儀在532nm測定吸光度,。如果不方便測定532nm的吸光度,，也可以測定530-540nm之間的吸光度?？梢栽O定450nm為參考波長進行雙波長測定,。
d. MDA含量的計算：對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據標準曲線計算獲得MDA的摩爾濃度,，對于細胞,、或組織樣品，計算出樣品溶液中的MDA含量后,，可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量,，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

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