Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡便地檢測細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品,。該試劑盒可通過流式細(xì)胞儀來進行懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞的流式凋亡檢測,。那么你知道Elabscience一步法TUNEL流式凋亡檢測試劑盒怎么用嗎,？讓我們一起來看看吧,！

一、實驗步驟

1. 收集細(xì)胞并進行計數(shù),，每組取1×10⁶個細(xì)胞,，300×g 離心5 min，棄上清,。

注：若樣本為貼壁細(xì)胞,，凋亡細(xì)胞會有部分懸浮于上清中，上清中的細(xì)胞也要收集,。

2. 加入200 μL PBS（含 1%BSA）重懸細(xì)胞,，加入200 μL Fixation Buffer，室溫固定60 min（推薦使用搖轉(zhuǎn)方式,，或每 15 min 混勻一次）,。

3. 加入1mL PBS（含 1%BSA），600×g 離心 5 min,，棄上清,。

4. 加入200 μL Permeabilization Buffer，冰上破膜 10 min,。

注：破膜溫度過高或者時間過久會導(dǎo)致細(xì)胞破碎,，因此建議Permeabilization Buffer 解凍后放置在 4°C，待使用前取出,；另外破膜時間最長不要超過15 min,。

5. 加入1~2 mL PBS（含 1%BSA）終止破膜，輕輕吹打混勻后,，600×g離心 5 min,，棄上清。

6. 加入200 μL TdT Equilibration Buffer,，輕輕吹打混勻,，37°C平衡15 min。

7. 600×g離心5 min,，棄上清,，收集細(xì)胞沉淀。

8. 按照分組參考下表配制標(biāo)記工作液,，每個樣本加入100μL反應(yīng)液（充分混勻,，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

注：

① TdT Equilibration Buffer 使用前,，室溫靜置直至wan全溶解,。冰凍的平衡液融化后可能會出現(xiàn)鈷鹽結(jié)晶，此為正常現(xiàn)象,。使用前渦旋混勻,。

② Labeling Solution 使用前，請置于冰上溶解,，待wan全溶解后離心,，用槍頭吹打混勻。

③ TdT Enzyme 對溫度較敏感,，請嚴(yán)格保存于-20°C,，使用前取出，使用后立即放回,。

④ 配制標(biāo)記工作液時,，建議不要渦旋。

9. 37°C 避光孵育60 min（每 20 min 輕輕搖晃混勻細(xì)胞）,。

10. 加入1mL Stop Solution輕輕吹打混勻,，室溫靜置5 min，加入 300~500 μL PBS(含 1%BSA),，600×g離心 5 min,，棄上清。

11. 加入 200 μL PBS（含 1%BSA）重懸細(xì)胞,，上機檢測,。

更多有關(guān)Elabscience一步法TUNEL流式凋亡檢測試劑盒的使用方法，請聯(lián)系Elabscience試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,。