詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度,。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴增效果不佳,,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,,特別是3'端的互補,,否則會形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,,混勻,,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR,。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1,、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2,、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次),;
3,、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
氘代-d6分子式:84.15分子量: C6D6英文名稱:Deuterium substituted benzene -d6CAS號:1076-43-3
1-溴-3-(五氟磺酰)分子式:283.06分子量: C6H4BrF5S英文名稱:1- -3- (five f) benzeneCAS號:672-30-0
3-溴-6-羥-2-甲吡分子式:188.02分子量: C6H6BrNO英文名稱:3- -6- hydroxy -2- methyl pyridineCAS號:54923-31-8
1-Boc-4-分子式:311.16分子量: C10H18INO2英文名稱:1-Boc-4- iodine piperidineCAS號:301673-14-3
2-二氟甲溴分子式:分子量: C7H5BrF2英文名稱:2- two - methyl fluorideCAS號:845866-82-2
亞硝紅鹽英文名稱:Nitroso R saltCAS號:525-05-3分子式:377.26分子量: C10H5NNa2O8S2;ONC1
7-溴-1-羥異喹啉分子式:224.05分子量: C9H6BrNO英文名稱:7- -1- hydroxy ISOCAS號:223671-15-6
2,4-二羥甲英文名稱:2,4- two hydroxy benzoic acidCAS號:89-86-1分子式:154.12分子量: C7H6O4
對偶氮分子式:197.24分子量: C12H11N3英文名稱:P-aminoazobenzeneCAS號:22162
托曲珠利英文名稱:ToltrazurilCAS號:69004-03-1分子式:425.38分子量: C18H14F3N3O4S
二并噻吩砜分子式:216.26分子量: C12H8O2S英文名稱:Two benzene and thiopheneCAS號:1016-05-3
FSIP1 纖維性鞘結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
CYP11A1/P450SCC 細(xì)胞色素P450 11A1抗體 0.1ml
BMP11 骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE PE標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml
Tubb3/Tubulin beta 3 微管蛋白β3抗體 0.1ml
SM-MHC 心肌肌球蛋白抗體(α-myosin) 0.1ml
LRCH2 富含亮氨酸重復(fù)家庭蛋白2抗體 0.2ml
phospho-eIF4G(ser1108) 磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體 0.1ml
DCUN1D4 DCUN1D4蛋白抗體 0.2ml
phospho-VAV3(Tyr173) 磷酸化鳥嘌呤核苷酸交換因子VAV3抗體 0.1ml
ZHX2/Alpha fetoprotein regulator 1 甲胎蛋白調(diào)節(jié)蛋白1抗體 0.2ml